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化學發(fā)光試劑都有哪些注意事項
更新時間：2017-02-08瀏覽：1618次
化學發(fā)光試劑注意事項,允許步驟2-5在日光燈下進行方便操作,但在強光下操作時間拖得太長,靈敏度可能會有一定程度降低,移到暗房操作可避免之.戴手套可以避免在膜上留下手印.長時間曝光或蛋白過量,將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關(guān)系.與工作液孵育1-5分鐘后膜上的條帶發(fā)光.強條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見,低豐度蛋白條帶可能發(fā)光較弱,但仍可成功進行X光膠片曝光.不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間.熒光可持續(xù)10小時以上,條帶弱時可延長曝光至1-10個小時.
化學發(fā)光試劑由于超敏發(fā)光液及其靈敏,對大多數(shù)來源的進口抗體我們強烈推薦抗體的起始濃度為一抗1:1000，二抗1:2000。通常為一抗1:2000二抗1:4000或更加稀釋。 抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶,導致失敗.某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜.使用預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可確定條帶位置和大小.
化學發(fā)光試劑實驗前,先將實驗中所需的所有試劑及待測樣品從冰箱中取出,待溫度與室溫（25℃）平衡1小時以上后使用.加樣前應(yīng)將所用試劑和待測樣本分別充分混勻.酶結(jié)合物和抗體混勻時,切忌產(chǎn)生大量氣泡.實驗中用于凍干品復溶和稀釋濃縮洗滌液所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量.凍干品加入蒸餾水或去離子水后,應(yīng)蓋上膠塞后靜置，待固體物質(zhì)*溶解后，再將試劑瓶反扣在實驗臺上，讓附著在瓶蓋上的固體物質(zhì)溶解，然后充分混勻后待用.
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